O jogo contará com todos os três personagens principais da série até agora: Altaïr ibn La-Ahad, Ezio Auditore da Firenze e Desmond Miles. O jogo passará no ano de 1511d.c, Ezio está em busca de segredos escondidos pelo lendário Altaïr em Masyaf, antigo lar da Ordem dos Assassinos. Após ser surpreendido pelos Templários, Ezio viaja até a capital do Império Otomano, Constantinopla, que está dividida em quatro distritos para encontrar misteriosas chaves escondidas pelo explorador Nicolau Polo, se estas chaves cairem nas mãos dos Templários, poderão destruir segredos não só dos Assassinos, mas de toda a história da humanidade.